简介
甲酸是最简单的羧酸，因最早由蒸馏赤蚁获得，故又称蚁酸。主要引起皮肤、粘膜的刺激症状。接触后可引起结膜炎、眼睑水肿、鼻炎、支气管炎，重者可引起急性化学性肺炎。
浓甲酸口服后可腐蚀口腔及消化道粘膜，引起呕吐、腹泻及胃肠出血，甚至因急性肾功能衰竭或呼吸功能衰竭而致死。皮肤接触可引起炎症和溃疡。偶有过敏反应。
C(CH2OH)4白色结晶,熔点261～262℃。是B.托伦斯在1882年研究氢氧化钡与不纯的甲醛之间的反应时首先发现的。1891年托伦斯进一步指出它是甲醛与乙醛的反应产物。
1938年美国开始用甲醛和乙醛生产季戊四醇。此法迄今仍是工业上采用的唯一方法。在碱性溶液中，甲醛与乙醛发生下列反应：(HOCH2)3CCHO＋HCHO＋NaOH─→C(CH2OH)4＋HCOONa
前一反应是可逆的，以碱为催化剂；后一反应则为不可逆反应，并消耗等分子的碱。因此，总的收率较高，以乙醛计＞90％（摩尔％）。主要的副产物有聚季戊四醇、树脂等。
理论上甲醛与乙醛的摩尔比应为4,实际生产中略大于此值。反应为放热过程，温度控制在≤60℃。反应液经蒸发、冷却，即得季戊四醇结晶。
应用
新生儿Fc受体(neonatal Fc receptor,FcRn)能够特异性识别并跨越黏膜屏障转运IgG。为了确定猪(Sus scrofa)FcRn与IgG抗体Fc段CH2结构域的互作关系,本研究通过逆转录PCR技术克隆获得猪IgG抗体Fc段CH2基因片段。
并将其亚克隆至原核表达载体pEGX-4T-1,经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导融合蛋白表达并通过谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase,GST)亲和柱纯化。
同时将IgGCH2基因片段亚克隆至真核表达载体pEGFP-C1,通过共转染确定IgGCH2与FcRn在非洲绿猴(Chlorocebus sabaeus)肾细胞(COS-7)中的细胞共定位,免疫共沉淀验证IgGCH2与FcRn的相互作用;进一步通过ELISA方法检测CH2与FcRn在不同pH值下的结合力。
结果表明,克隆获得猪IgGCH2基因全长330bp,编码110个氨基酸。诱导表达的融合蛋白GST-CH2相对分子量为38.4kD,该蛋白在诱导菌体中以可溶性和包涵体两种形式存在。
激光共聚焦观察显示,IgG CH2与FcRn共定位于细胞质中,具有共聚集现象。免疫共沉淀显示,通过标签蛋白GFP和Flag,在所有的共沉淀条带中,均能检测到对应的目的条带,说明IgGCH2能够结合FcRn。
ELISA结果表明,IgGCH2与FcRn的结合呈现pH值依赖性。综上所述,本研究确定了FcRn与IgG抗体Fc段CH2结构域存在细胞共定位与互作关系,二者的结合具有pH依赖性,这为构建新的基于Fc的小型抗体融合蛋白提供了材料。
