簡介
甲酸是最簡單的羧酸，因最早由蒸餾赤蟻獲得，故又稱蟻酸。主要引起皮膚、粘膜的刺激症狀。接觸後可引起結膜炎、眼睑水腫、鼻炎、支氣管炎，重者可引起急性化學性肺炎。
濃甲酸口服後可腐蝕口腔及消化道粘膜，引起嘔吐、腹瀉及胃腸出血，甚至因急性腎功能衰竭或呼吸功能衰竭而緻死。皮膚接觸可引起炎症和潰瘍。偶有過敏反應。
C(CH2OH)4白色結晶,熔點261～262℃。是B.托倫斯在1882年研究氫氧化鋇與不純的甲醛之間的反應時首先發現的。1891年托倫斯進一步指出它是甲醛與乙醛的反應産物。
1938年美國開始用甲醛和乙醛生産季戊四醇。此法迄今仍是工業上采用的唯一方法。在堿性溶液中，甲醛與乙醛發生下列反應：(HOCH2)3CCHO＋HCHO＋NaOH─→C(CH2OH)4＋HCOONa
前一反應是可逆的，以堿為催化劑；後一反應則為不可逆反應，并消耗等分子的堿。因此，總的收率較高，以乙醛計＞90％（摩爾％）。主要的副産物有聚季戊四醇、樹脂等。
理論上甲醛與乙醛的摩爾比應為4,實際生産中略大于此值。反應為放熱過程，溫度控制在≤60℃。反應液經蒸發、冷卻，即得季戊四醇結晶。
應用
新生兒Fc受體(neonatal Fc receptor,FcRn)能夠特異性識别并跨越黏膜屏障轉運IgG。為了确定豬(Sus scrofa)FcRn與IgG抗體Fc段CH2結構域的互作關系,本研究通過逆轉錄PCR技術克隆獲得豬IgG抗體Fc段CH2基因片段。
并将其亞克隆至原核表達載體pEGX-4T-1,經異丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)誘導融合蛋白表達并通過谷胱甘肽巯基轉移酶(glutathione S-transferase,GST)親和柱純化。
同時将IgGCH2基因片段亞克隆至真核表達載體pEGFP-C1,通過共轉染确定IgGCH2與FcRn在非洲綠猴(Chlorocebus sabaeus)腎細胞(COS-7)中的細胞共定位,免疫共沉澱驗證IgGCH2與FcRn的相互作用;進一步通過ELISA方法檢測CH2與FcRn在不同pH值下的結合力。
結果表明,克隆獲得豬IgGCH2基因全長330bp,編碼110個氨基酸。誘導表達的融合蛋白GST-CH2相對分子量為38.4kD,該蛋白在誘導菌體中以可溶性和包涵體兩種形式存在。
激光共聚焦觀察顯示,IgG CH2與FcRn共定位于細胞質中,具有共聚集現象。免疫共沉澱顯示,通過标簽蛋白GFP和Flag,在所有的共沉澱條帶中,均能檢測到對應的目的條帶,說明IgGCH2能夠結合FcRn。
ELISA結果表明,IgGCH2與FcRn的結合呈現pH值依賴性。綜上所述,本研究确定了FcRn與IgG抗體Fc段CH2結構域存在細胞共定位與互作關系,二者的結合具有pH依賴性,這為構建新的基于Fc的小型抗體融合蛋白提供了材料。
