使用方法
室溫下運輸,幹粉在室溫下儲存，溶于水、甲醇，溶液于-20℃儲存由于各真核細胞系對G418敏感度不同,各新細胞系或株穩定轉染時殺死非穩定轉染細胞所需用量需要通過實驗優化。最适用量通過建立細胞死亡曲線獲得。将細胞稀釋至1000cell/ml，每孔100ul加入有培養基的24孔闆，将每孔中的G418濃度稀釋至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12個級别,培養10-14天，以細胞全部死亡最低濃度為基準，一般400-800左右，篩選時比該濃度再高一個級别，維持時使用篩選濃度的一半即可。
濃度範圍
細胞系或機體G418濃度（ug/ml）
中國倉鼠卵巢細胞700～800
Madin－Darby犬腎細胞500
人上皮A431細胞400
猿CV-1細胞500
盤基網柄菌屬10～35
植物10
酵母125～500
質量指标
G418：白色粉末，融點138～144℃，溶于水、甲醇。CASNo.：108321-42-2
分子式：C20H40N4O10?2H2SO4分子量：692.71
比旋：+104o～+121o水分：≤10%吸光值：≤0.015(280nm,1mg/ml),≤0.1(570nm,100mg/ml)
效價：>700ug/mg
[儲運]室溫下運輸,幹粉在室溫下儲存，溶液于-20℃儲存。
篩選
由于每種細胞對G418的敏感性不同，而且不同的廠家生産的相同濃度的G418的活性不盡相同，所以在篩選之前，一定要确定G418的最佳篩選濃度。具體如下：将細胞稀釋到1000個細胞/mL，在100ug/mL~1mg/mL的G418濃度範圍内進行篩選，選擇出在10~14天内使細胞全部死亡的最低G418濃度來進行下一步的篩選試驗。
由于每種細胞對G418的敏感性不同，一般變動在100ug/ml～1000ug/ml範圍。在篩選之前，一定要确定細胞對這一批G418的最佳篩選濃度。盡管如此，特性明确的細胞系G418的最佳用量還是穩定的。《分子克隆》給出了幾個常用細胞系所需G418的最佳用量。
由于基因轉染到細胞内之後要一段時間才能表達出蛋白質。所以篩選不能太早；但是也不能太晚，因為轉染了外源基因的細胞代謝負荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉入的細胞所淹沒，最終導緻篩選不出陽性克隆，一般要在轉染24小時之後才開始加G418篩選。随着細胞的代謝G418的濃度和活性都會下降，所以每3~5天都要更換一次含有G418的篩選液。這時藥物濃度可以降至200ug/ml。
加藥篩選約6天左右，細胞會大量死亡，孔中隻剩下的細胞寥寥無幾。這時會出現兩個問題：1.死亡的細胞會裂解釋放出有害物質，導緻那些有neo表達的陽性細胞死亡，即非選擇性死亡。2.孔中細胞數目很少，細胞之間的信号會變得很弱，也會導緻陽性細胞的狀态不佳甚至死亡。這個時候需要一種特殊的培養液：假如你要轉染3T3細胞，在3T3細胞彙合度達到80%的時候，換液，培養過夜之後收集培養液，通過濾器消毒，和新鮮的培養液按1：1混合備用。再轉染後篩選過程中就可以應用這種培養基。
為了盡量減少陰性克隆的死亡給陽性克隆造成的不利影響以及增加陽性克隆的得率，可以應用套環法或刮除法結合有限稀釋法來篩選陽性克隆。加藥後，在高倍鏡下，陽性克隆和陰性克隆很容易辨認，在陽性克隆下用記号筆做個标記。然後刮除陰性克隆，消化陽性克隆後繼續篩選培養；或者用套環套住陽性克隆，在套環内加胰蛋白酶或EDTA消化，把消化液吸到另外一個新的孔中培養。最後再用有限稀釋法把陽性克隆在96孔闆中篩選。
一般經過4周左右的篩選，得到的陽性克隆都比較穩定。但是外源基因如果沒有整合到基因組中的話，目的基因還是很容易丢失的。但是外源基因整合到基因組中的概率太小了，而且是随機整合，會導緻表達的目的蛋白的量産生很大差異。随着培養時間的延續，那些丢失了外源基因的細胞和很少表達目的基因的細胞會占據優勢，強表達目的蛋白的細胞會越來越少。這樣再次篩選是必不可少的。隻有經過2次以上的篩選之後才能找到那種我們想要的強分泌目的蛋白的，遺傳穩定的細胞克隆。
