PAS染色法

PAS染色法

检测组织中糖类的方法
PAS染色法(Periodic Acid-Schiff stain)在组织学上,主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基,再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。[1]
    中文名:PAS染色法 外文名:Periodic Acid-Schiff stain 所属学科:组织学 主要用来:检测组织中的糖类 又称:过碘酸雪夫染色 主要用来:检测组织中的糖类

原理

PAS染色又称过碘酸雪夫染色,糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。

原理:过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液的无色品红结合,红色,定位于胞浆上。

应用

随着医学实验技术的发展,糖原染色应用的范围更加广泛,如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质,心肌病变及其他心血管疾病的诊断,糖原累积病诊断和研究,糖尿病的诊断和研究,用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外,还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供了重要的依据。

方法

固定液

Carnoy固定液:纯酒精60ml,冰醋酸10ml,氯仿30ml,也可以选用75%酒精。

液配制

1)过碘酸酒清夜配法:

过碘酸0.4g95%,酒精35mlM/5,醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml)5ml,蒸馏水10ml。

保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周。

2)Schiff氏液:

0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解。冷却至50℃后过滤加入10毫升1N盐酸。冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存。

3)Schiff氏酒精液配置Schiff氏液11.5ml,1NHCI0.5ml,纯酒精23ml。

4)亚硫酸水,1%偏重亚硫酸钠10ml,1NHCI10ml,蒸馏水180ml的树胶溶解。

5)哈瑞或迈耶苏木精。

染色步骤

1.石蜡切片脱蜡至水(细胞涂片,冰冻切片直接水洗)。

2.蒸馏水洗。

3.过碘酸酒清夜10min。

4.自来水冲洗10min。

5.Schiff氏液10min。

6.流水冲洗5min。

7.用哈瑞苏木精或迈耶苏木精染核3min(细胞核染色过深可用盐酸酒精分化)。

8.流水冲洗5min。

9.常规脱水、透明、封固。

结果

PAS阳性为红色,细胞核蓝色。

实验效果

准备

1、10g/L过碘酸液。

2、Schiff染液:碱性品红0.5g,DH2O100ml。

煮沸后,待片刻,加入碱性品红,振荡数分钟使品红溶解,冷至50℃加入1M的盐酸20ml,混匀。待冷却至25℃加入偏重亚硫酸钠0.5g,混合,置于带塞的棕色瓶中,放于暗处24小时,染液为无色,如为微红则加活性炭1-2g,混合过滤,如过滤液仍有红色,应再加少许活性炭,时红色完全被吸收为止。制成后置于棕色瓶内保存在冰箱备用,如变为红色,则不能使用。

4、苏木素液:苏木素0.9g,95%乙醇10ml,铵(钾)明矾20g,DH2O200ml。

将苏木素溶于95%的乙醇,钾明矾溶于水(可加热),然后将苏木素液加入明矾液中混合,用强火煮沸后加氧化汞0.5g,迅速搅拌,成深紫色,迅速移入冷水中,次日过滤,临用时取此液95ml加冰醋酸5ml,可使细胞着色清楚。

方法

1、将新鲜血片或骨髓片用95%乙醇固定10分钟。

2、10g/L过碘酸液作用20分钟。

3、DH2O洗涤几次,晾干。

4、Schiff染液,60分钟。

5、用自来水洗涤15分钟(细水长流冲洗)。

6、苏木素染液10分钟。

7、自来水冲洗15分钟,待干。

结果

阳性反应,胞浆呈红色,阴性反应,胞浆呈无色;

在正常血片中RBC不染色;

PLT染成深红色;

中性粒细胞胞浆染成红色或深红色,有些细胞有阳性颗粒;

单核细胞的胞浆染成淡红色,可含有细小或粗大阳性颗粒;

少数淋巴细胞的胞浆内含有少许小的淡红色或红色颗粒;

正常骨髓的幼稚细胞和有核RBC都不染色;

巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。

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