原理
PAS染色又稱過碘酸雪夫染色,糖原染色。一般用來顯示糖元和其它多糖物質。
原理:過碘酸能使細胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再與Schiff氏液的無色品紅結合,紅色,定位于胞漿上。
應用
随着醫學實驗技術的發展,糖原染色應用的範圍更加廣泛,如用以證明與鑒别細胞内空泡狀的性質,心肌病變及其他心血管疾病的診斷,糖原累積病診斷和研究,糖尿病的診斷和研究,用于某些腫瘤的診斷等。除用于糖原的鑒定和黏液的顯示外,還可以觀察腎小球基底膜、結腸杯狀細胞中性黏液物質、阿米巴滋養體和黴菌的着色。臨床診斷、分類和治療提供了重要的依據。
方法
固定液
Carnoy固定液:純酒精60ml,冰醋酸10ml,氯仿30ml,也可以選用75%酒精。
液配制
1)過碘酸酒清夜配法:
過碘酸0.4g95%,酒精35mlM/5,醋酸鈉(2.72g+蒸餾水100ml)5ml,蒸餾水10ml。
保存于冰箱内,用棕色瓶,可用兩周。
2)Schiff氏液:
0.5克堿性品紅加入100毫升蒸餾水中,時時搖動三角瓶5分鐘,使之充分溶解。冷卻至50℃後過濾加入10毫升1N鹽酸。冷卻至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸鈉,在室溫中至少靜置24小時,然後密封冰箱保存。
3)Schiff氏酒精液配置Schiff氏液11.5ml,1NHCI0.5ml,純酒精23ml。
4)亞硫酸水,1%偏重亞硫酸鈉10ml,1NHCI10ml,蒸餾水180ml的樹膠溶解。
5)哈瑞或邁耶蘇木精。
染色步驟
1.石蠟切片脫蠟至水(細胞塗片,冰凍切片直接水洗)。
2.蒸餾水洗。
3.過碘酸酒清夜10min。
4.自來水沖洗10min。
5.Schiff氏液10min。
6.流水沖洗5min。
7.用哈瑞蘇木精或邁耶蘇木精染核3min(細胞核染色過深可用鹽酸酒精分化)。
8.流水沖洗5min。
9.常規脫水、透明、封固。
結果
PAS陽性為紅色,細胞核藍色。
實驗效果
準備
1、10g/L過碘酸液。
2、Schiff染液:堿性品紅0.5g,DH2O100ml。
煮沸後,待片刻,加入堿性品紅,振蕩數分鐘使品紅溶解,冷至50℃加入1M的鹽酸20ml,混勻。待冷卻至25℃加入偏重亞硫酸鈉0.5g,混合,置于帶塞的棕色瓶中,放于暗處24小時,染液為無色,如為微紅則加活性炭1-2g,混合過濾,如過濾液仍有紅色,應再加少許活性炭,時紅色完全被吸收為止。制成後置于棕色瓶内保存在冰箱備用,如變為紅色,則不能使用。
4、蘇木素液:蘇木素0.9g,95%乙醇10ml,铵(鉀)明礬20g,DH2O200ml。
将蘇木素溶于95%的乙醇,鉀明礬溶于水(可加熱),然後将蘇木素液加入明礬液中混合,用強火煮沸後加氧化汞0.5g,迅速攪拌,成深紫色,迅速移入冷水中,次日過濾,臨用時取此液95ml加冰醋酸5ml,可使細胞着色清楚。
方法
1、将新鮮血片或骨髓片用95%乙醇固定10分鐘。
2、10g/L過碘酸液作用20分鐘。
3、DH2O洗滌幾次,晾幹。
4、Schiff染液,60分鐘。
5、用自來水洗滌15分鐘(細水長流沖洗)。
6、蘇木素染液10分鐘。
7、自來水沖洗15分鐘,待幹。
結果
陽性反應,胞漿呈紅色,陰性反應,胞漿呈無色;
在正常血片中RBC不染色;
PLT染成深紅色;
中性粒細胞胞漿染成紅色或深紅色,有些細胞有陽性顆粒;
單核細胞的胞漿染成淡紅色,可含有細小或粗大陽性顆粒;
少數淋巴細胞的胞漿内含有少許小的淡紅色或紅色顆粒;
正常骨髓的幼稚細胞和有核RBC都不染色;
巨核細胞的胞漿内呈彌散紅色或深紅色。



















