PAS染色法

PAS染色法

檢測組織中糖類的方法
PAS染色法(Periodic Acid-Schiff stain)在組織學上,主要用來檢測組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羟基氧化成醛基,再用Schiff試劑和醛基反應使呈現紫紅色。[1]
    中文名:PAS染色法 外文名:Periodic Acid-Schiff stain 所屬學科:組織學 主要用來:檢測組織中的糖類 又稱:過碘酸雪夫染色 主要用來:檢測組織中的糖類

原理

PAS染色又稱過碘酸雪夫染色,糖原染色。一般用來顯示糖元和其它多糖物質。

原理:過碘酸能使細胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再與Schiff氏液的無色品紅結合,紅色,定位于胞漿上。

應用

随着醫學實驗技術的發展,糖原染色應用的範圍更加廣泛,如用以證明與鑒别細胞内空泡狀的性質,心肌病變及其他心血管疾病的診斷,糖原累積病診斷和研究,糖尿病的診斷和研究,用于某些腫瘤的診斷等。除用于糖原的鑒定和黏液的顯示外,還可以觀察腎小球基底膜、結腸杯狀細胞中性黏液物質、阿米巴滋養體和黴菌的着色。臨床診斷、分類和治療提供了重要的依據。

方法

固定液

Carnoy固定液:純酒精60ml,冰醋酸10ml,氯仿30ml,也可以選用75%酒精。

液配制

1)過碘酸酒清夜配法:

過碘酸0.4g95%,酒精35mlM/5,醋酸鈉(2.72g+蒸餾水100ml)5ml,蒸餾水10ml。

保存于冰箱内,用棕色瓶,可用兩周。

2)Schiff氏液:

0.5克堿性品紅加入100毫升蒸餾水中,時時搖動三角瓶5分鐘,使之充分溶解。冷卻至50℃後過濾加入10毫升1N鹽酸。冷卻至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸鈉,在室溫中至少靜置24小時,然後密封冰箱保存。

3)Schiff氏酒精液配置Schiff氏液11.5ml,1NHCI0.5ml,純酒精23ml。

4)亞硫酸水,1%偏重亞硫酸鈉10ml,1NHCI10ml,蒸餾水180ml的樹膠溶解。

5)哈瑞或邁耶蘇木精。

染色步驟

1.石蠟切片脫蠟至水(細胞塗片,冰凍切片直接水洗)。

2.蒸餾水洗。

3.過碘酸酒清夜10min。

4.自來水沖洗10min。

5.Schiff氏液10min。

6.流水沖洗5min。

7.用哈瑞蘇木精或邁耶蘇木精染核3min(細胞核染色過深可用鹽酸酒精分化)。

8.流水沖洗5min。

9.常規脫水、透明、封固。

結果

PAS陽性為紅色,細胞核藍色。

實驗效果

準備

1、10g/L過碘酸液。

2、Schiff染液:堿性品紅0.5g,DH2O100ml。

煮沸後,待片刻,加入堿性品紅,振蕩數分鐘使品紅溶解,冷至50℃加入1M的鹽酸20ml,混勻。待冷卻至25℃加入偏重亞硫酸鈉0.5g,混合,置于帶塞的棕色瓶中,放于暗處24小時,染液為無色,如為微紅則加活性炭1-2g,混合過濾,如過濾液仍有紅色,應再加少許活性炭,時紅色完全被吸收為止。制成後置于棕色瓶内保存在冰箱備用,如變為紅色,則不能使用。

4、蘇木素液:蘇木素0.9g,95%乙醇10ml,铵(鉀)明礬20g,DH2O200ml。

将蘇木素溶于95%的乙醇,鉀明礬溶于水(可加熱),然後将蘇木素液加入明礬液中混合,用強火煮沸後加氧化汞0.5g,迅速攪拌,成深紫色,迅速移入冷水中,次日過濾,臨用時取此液95ml加冰醋酸5ml,可使細胞着色清楚。

方法

1、将新鮮血片或骨髓片用95%乙醇固定10分鐘。

2、10g/L過碘酸液作用20分鐘。

3、DH2O洗滌幾次,晾幹。

4、Schiff染液,60分鐘。

5、用自來水洗滌15分鐘(細水長流沖洗)。

6、蘇木素染液10分鐘。

7、自來水沖洗15分鐘,待幹。

結果

陽性反應,胞漿呈紅色,陰性反應,胞漿呈無色;

在正常血片中RBC不染色;

PLT染成深紅色;

中性粒細胞胞漿染成紅色或深紅色,有些細胞有陽性顆粒;

單核細胞的胞漿染成淡紅色,可含有細小或粗大陽性顆粒;

少數淋巴細胞的胞漿内含有少許小的淡紅色或紅色顆粒;

正常骨髓的幼稚細胞和有核RBC都不染色;

巨核細胞的胞漿内呈彌散紅色或深紅色。

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