主要角色
神盾局（S.H.I.E.L.D.）
全稱為國土戰略防禦攻擊與後勤保障局，是美國政府建立用于同超能力英雄接洽并進行管理的特殊部隊，主要基地為神盾航空母艦（第一季結尾被炸毀，第二季重新建造）本片中神盾局招募了以蜘蛛俠為主的一批年輕超級英雄并訓練他們成為更好的英雄，是蜘蛛俠和他的隊友們受訓地點和基地。
蜘蛛俠（Spider-Man）
原名彼得帕克，再一次參加奧斯本集團舉行的科技展中意外被一隻變異蜘蛛咬傷，從而獲得了蜘蛛一般的特殊能力，與其他關于蜘蛛俠的作品不同，本片中的小蜘蛛再也不是以前的那個獨行俠了，他也有了自己的隊友，并有了自己的高科技裝備，而更加獨特的是，我們的小蜘蛛竟然可以打破第四堵牆與影片之外的觀衆進行對話。
能力：擁有蜘蛛一般的力量，速度，靈敏度，對危險快速做出反應的蜘蛛感應，但不像蜘蛛那樣自由射網，但他靠着自己的智慧發明并命名為“蛛網發射器”的裝置射出蜘蛛絲，在加入神盾局後裝置獲得了改進，能射出質量更高的網和電擊網
鐵拳（Iron Fist）
原名丹尼爾.蘭德，一位來自昆侖的格鬥高手，通過了不朽的龍——Shou-Lao的考驗獲得了獲得了鋼鐵般的拳頭以及鐵拳的稱号，并将成為下一任昆侖王，長老給了他一年的時間與外界告别，但他卻選擇加入神盾與邪惡作鬥争，在第二季，鐵拳将重返昆侖，接受王的使命，長老卻被他的成長和與蜘蛛俠等夥伴的感情所感染，決定再給他一年時間與外界告别
能力：在昆侖修煉多年使他成為了一名格鬥高手，其力量、速度敏捷以及神經反應都得了空前的提高，而通過壽老的考驗，讓他獲得了一個鋼鐵一般的拳頭，足以擊碎一切目标，第二季，鐵拳被蠍子激怒，激發了内心的力量，從而獲得了第二個“鐵拳”
白虎（White Tiger）
Ava Ayala，繼他爺爺和父親之後的第三代“白虎”，力量來源是家族的白虎護身符，父親死後繼承了它，獲得了白虎的力量，死敵是獵人克拉文，因為他殺死了自己的父親。
能力：有敏捷的速度和超強的跳躍力，以及自由伸縮的鋒利指甲，加入神盾局後，得到了電爪
神力俠（Powerman)
本名盧克凱奇，父母均為神盾局的科學家，他們發明了一種血清，能夠使人獲得超人般的力量，再一次飛機失事中，凱奇的父母為了讓他活下去，把血清給凱奇喝下并将他退下推下飛機，靠着血清賦予的力量，盧克凱奇活了下來并成為了神力俠，第二季中，我們會發現凱奇的父母并沒有死亡，而是被天蠍騙到了十二宮成為了那裡的研究人員，而他們的工作就是複制那種特殊的血清。
能力：血清賦予了它超強的力量以及堅不可摧的皮膚。
新星(Nova)
薩姆.亞曆山大，新星軍團最後的成員，他的頭盔具有強大的力量，曾為銀河守護者的議員，之後退出并成為了神盾局的一員(貌似他不怎麼喜歡長期與外星生物在一起生活），第三季銀河守護者特輯中，新星激發了頭盔的力量升級為黑色頭盔，力量也得到加強，蜘蛛俠稱其為“終極新星”
能力：高速飛行，能量光束，以及全身發出強烈光芒（但會消耗大量能量）其能力由新星頭盔提供，頭盔升級後，力量也獲得了增強。
尼克.弗瑞（Nicholas Joseph Fury）
神盾局局長，具有極強的領導能力和個人行動能力，除漫畫以外，曾出現在漫威多個影視作品中，在漫畫原著中（616宇宙），尼克弗瑞是個白人，但本片中它的設計則更貼近于終極世界（1616宇宙）和電影世界（199999宇宙），為黑人形象，招募了以蜘蛛俠為主的新一批年輕英雄并對他們進行指導。
菲爾·科爾森（Phil Coulson）
神盾局第8級特工，尼克弗瑞的重要助手，動畫組為了更好的配合蜘蛛俠等人的活動，成為了彼得所在高中的校長，并以極快的速度将學校和彼得的家改造成為具有多種機關密道和高科技的神秘基地
斯坦·李（Stan Lee）
尼克弗瑞安排在學校的秘密特工，神盾局元老級成員，平時在學校擔任保潔員工作，秘密監視學校發生的一舉一動，第二季十五集，他幫助彼得帕克和他的兩個朋友（瑪麗簡和哈利奧斯本）對付蜥蜴博士（科特·康納斯），而在此前，蜘蛛俠并不知道他的身份
熟悉漫威的朋友們應該都知道，本片中的斯坦李原型正是漫威衆多著名人物的創造者（包括蜘蛛俠，鋼鐵俠，x戰警，神奇四俠，綠巨人..........）也是神盾局的創造者之一，他本人也正是漫威電影的客串之王，幾乎所有的漫威電影和動畫他都有幾秒鐘的戲份，不過我們的斯坦李老爺子像這樣長期在一部作品中打醬油并有一集專場戲份貌似還是第一次。
劇情介紹
在這部動畫裡，蜘蛛俠加入了“神盾”，結識了新夥伴：白虎、新星、神力俠、鐵拳，還擁有了自己的盔甲（類似鋼鐵俠，是史塔克公司給他做的。穿上盔甲時，他被稱之為“鋼鐵蜘蛛俠”）。還有章魚博士、毒液、綠魔等壞人與他作對。綠魔擁有他的DNA，或者說，綠魔可以算是他創造出來的。
影片評價
蜘蛛看點多多！小蜘蛛各種萌各種可愛，話唠屬性點滿，雖然是戴着面具的臉，但表情之豐富造型之有趣實在是少見，非常非常好玩！
故事是小蜘蛛成名以後，被尼克弗瑞(Nick Fury)招攬，加入了神盾局（S.H.I.E.L.D.)。對于各路大英雄來說小蜘蛛實在是渺小，于是招待他的是各種鍛煉測試，務求讓他成為終極-蜘蛛俠(Ultimate Spider-man)。
雖然戲份更多的是同隊的鐵拳(Iron Fist)，白虎(WhiteTiger)，神力俠（Powerman)，新星(Nova)，但是從第五集開始，鋼鐵俠(Iron man)、浩克(The Hulk)、雷神(Thor)、金剛狼(Wolverine)、怪奇博士(Doctor Strange)、鷹眼（hawkeye)、石頭人(the thing)銀河守護者(Guardians Of The Galaxy)刀鋒戰士(blade)、死侍(deadpool)(第二季16集出場)紛紛登場，真是熱鬧非凡。
