苯丙氨酸解氨酶

苯丙氨酸解氨酶

生成反式桂皮酸所需酶
苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)催化苯丙氨酸的脫氨反應,使NH3釋放出來形成反式肉桂酸。[1]此酶的在植物體内次生物質(如木質素等)代謝中起重要作用。
    中文名:苯丙氨酸解氨酶 外文名: 适用領域: 所屬學科: 英文名:phenylalanine ammonialyase 存在部位:高等植物、酵母、菌類可溶性部分 發現時間:1961年在大麥中發現的

簡介

是催化直接脫掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。EC.4.3.1.5。是1961年J.Koukol,E.Conn在大麥中發現的。存在于高等植物、酵母、菌類的可溶性部分。推測分子量為30萬。這是一個可把苯丙氨酸用于酚類化合物合成的酶。在很多情況下,其反應成為酚類化合物合成的有步驟的速率階段。

在組織中的活性可随外界因素而發生顯著變化,用光照,病傷害,植物激素處理等會使活性顯著增加。另外有時還受光敏色素所支配。在多數情況下,在組織中活性增加的同時,酶發生失活作用,這時組織中具有活性酶的量很快就會減少,據認為,這種失活是與類蛋白質物質作用有關。此外也已指出有非活性的酶的存在。

活性測定

原理

苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)催化苯丙氨酸的脫氨反應,使NH3釋放出來形成反式肉桂酸。此酶的在植物體内次生物質(如木質素等)代謝中起重要作用。根據其産物,反式肉桂酸在290nm處吸光度的變化可以測定該酶的活性。

材料、儀器設備及試劑

(一)材料:馬鈴薯塊莖

(二)儀器設備:1.紫外分光光度計;2.離心機;3.研缽;4.吸濾瓶;5.紅光裝置;6.打孔器。

(三)試劑:1.0.05mol/L硼酸鹽緩沖溶液(pH8.8);2.0.02mol/L苯丙氨酸(用0.1mol/LpH8.8硼酸緩沖液配制);3.5mmol/L巯基乙醇硼酸緩沖液。

實驗步驟

    馬鈴薯圓片制備

将馬鈴薯塊莖洗淨、削皮,用打孔器(直徑1.5cm)取圓柱,切除兩頭近表皮處,中間部分切成2mm厚的圓片。先用自來水漂洗,最後用蒸餾水洗一次,用紗布吸幹表面的水。

2.光誘導将圓片平鋪在濕潤濾紙的培養皿中,置20~30℃紅光下處理24h以誘導PAL(也可接種病原菌誘導等)。

3.酶粗提液的制備

經誘導處理的馬鈴薯圓片5g,加10ml含5mmol/L的巯基乙醇的硼酸緩沖液、0.5g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或PolyclarAT(除去酚類物質毒害,防止顔色的幹擾、少量石英砂在研缽中研磨。勻漿抽氣過濾,濾液10,000rpm離心15min,上清液為酶粗提液。上述操作均在0~4℃下進行。

4.活性測定與計算

1ml酶液加1ml0.02mol/L苯丙氨酸,2ml蒸餾水,總體積為4ml。對照不加底物,多加1ml蒸餾水;反應液置恒溫水浴30℃中保溫,0.5h後用紫外分光光度計在290nm處測定吸光度。以每小時在290nm處吸光度變化0.01所需酶量為一單位(相當每毫升反應混合物形成1μg肉桂酸)。蛋白質含量用Folin-酚法進行測定。

上一篇:保留時間

下一篇:紅外

相關詞條

相關搜索

其它詞條