赭曲黴毒素:黴菌毒素-中文百科頻道

簡介

赭曲黴毒素a是一種無色結晶化合物。可溶于極性有機溶劑和稀碳酸氫鈉溶液。微溶于水。其苯溶劑化物熔點94～96℃，二甲苯中結晶熔點169℃。有光學活性[α]D-118°。其紫外吸收光譜随pH值和溶劑極性不同而有别，在乙醇溶液中最大吸收波長為213nm和332nm。有很高的化學穩定性和熱穩定性。赭曲黴毒素主要侵害動物肝髒與腎髒。

赭曲黴毒素A是由多種生長在糧食（小麥、玉米、大麥、燕麥、黑麥、大米和黍類等）、花生、蔬菜（豆類）等農作物上的曲黴和青黴産生的。動物攝入了黴變的飼料後，這種毒素也可能出現在豬和母雞等的肉中。赭曲黴毒素主要侵害動物肝髒與腎髒。這種毒素主要是引起腎髒損傷，大量的毒素也可能引起動物的腸黏膜炎症和壞死。還在動物試驗中觀察到它的緻畸作用。

Hamilton等（1982）首次報道了大規模的火雞赭曲黴毒素中毒症，此後在美國、加拿大及歐洲各國的家禽和豬場也有報道。赭曲黴毒素(ochratoxins）是由多種曲黴和青黴菌産生的一類化合物，依其發現順序分别稱為赭曲黴毒素A(OTA）、赭曲黴毒素B(OTB）和赭曲黴毒素C(OTC）。

曆史

70年代前期，一直認為鮮綠青黴（Penicilliumviridicatum）是赭曲黴毒素A的主要産毒青黴菌；70年代後，Natori等（1970）和Pitt（1987）等研究表明，大多數疣孢青黴菌株（P.verrucosum）都可産生OTA；少數産紫青黴菌（P.purpurescens）和圓弧青黴菌株（P.cyclopium）也能産生OTA；而鮮綠青黴菌既不産生OTA，也不産生橘青黴素（citrinin）。對赭曲黴毒素的主要産毒青黴菌認識上存在的分歧，可能是由于研究者采用的真菌分類方法不同造成的。

Northolt等（1979）的研究表明，赭曲黴（圖赭曲黴菌）、圓弧青黴和鮮綠青黴菌産生OTA的最低水分活力（minimumwateractivity）分别為0.83～0.87、0.87～0.9和0.83～0.86；最适産毒溫度分别為12～37℃、4～31℃和4～31℃。因此，OTA的産生菌在濕熱的南方一般以赭曲黴菌為主，侵害水分大于16%的糧食和飼料。

而寒冷于燥的北方以青黴菌為主，有些青黴菌在0℃左右仍能生長，給飼料貯藏帶來極大困難。此外，不同菌株的适宜産毒底物也有差别，Madhyastha等（1990）報道，赭曲黴在花生餅和大豆餅中的産毒量，顯着高于在小麥和玉米中的産毒量，而疣孢青黴則相反。

正常條件下，小麥和玉米受OTA污染的機率較小，約1%～5%，其含量為0.01～5mg/kg；大麥和燕麥被污染的機率較高，約為10%，其含量一般在0.1mg/kg以下，個别樣品高達27mg/kg；據Zust等（1989）和Egmond（1994）報道，配合飼料約有5%～10%被污染，OTA含量0.05～0.4mg/kg。魏潤蘊等（1981）和牛鐘相等（1989）在糧食和飼料中也檢測出了OTA。另外，從王海彬等（1996）和王景琳等（1994）的調查結果，中國飼料曲黴菌和青黴菌的檢出率也很高。

性質

理化性質

OTA最早是由VanderMerwe等（1965）從赭曲黴菌（Aspergillusochraccus）（據Marquardt和Frohlich，1992，報道該菌現在稱為A．alutaceus）培養物中提純得到的。魏潤蘊等（1981）和孫惠蘭等（1989）也分别從糧食和配合飼料中提出OTA純品。分析表明OTA由7-羧-5-氯-8-羟-3，4-二氫-R-甲基異香豆素（簡稱Oa下同）和L-β-苯丙氨酸通過肽鍵連接而成（見圖赭曲黴毒素A的化學結構），分子式：C20H18CINO6，分子量403。

OTB是OTA的脫氯衍生物，OTC是OTA的乙基酯。OTA為無色晶體，溶于有機溶劑（氯仿和甲醇）和稀碳酸氫鈉溶液，微溶于水。在紫外線照射下OTA和OTB分别呈綠色和藍色熒光，最大吸收峰分别為333nm和318nm。

毒性毒理

赭曲黴毒素A對動物和人類的毒性主要有腎髒毒、肝毒、緻畸、緻癌、緻突變和免疫抑制作用。赭曲黴毒素A進入體内後在肝微粒體混合功能氧化酶的作用下，轉化為4一羟基赭曲黴毒素A和8一羟甚赭曲霍毒素A，其中以4一羟基赭曲黴毒素A為主

。

赭曲黴毒素的毒性強弱順序是：OTA>OTC>OTB。這在很大程度上取決于分子中第八位羟基的電離常數大小。OTB和OTC在被污染飼料中的含量一般較低，對大多數動物的毒性較OTA小。因此，飼料檢測時可以不考慮，主要分析OTA含量。

近來Creppy等（1983）和Hadidane等（1992）用色氨酸、缬氨酸、賴氨酸等氨基酸取代OTA分子中的苯丙氨酸，獲得了一系列OTA類似物，其中酪氨酸、缬氨酸、蘇氨酸和丙氨酸取代類似物的毒性最強，蛋氨酸、色氨酸和谷氨酸取代類似物次之，谷酰胺和脯氨酸取代類似物的毒性最低。Hadidane等（1991）報道，自然界也存在OTA的蘇氨酸、羟脯氨酸和賴氨酸取代類似物。

Marquardt等（1992）調查表明，飼料中OTA含量在0.3～16mg/kg時可引起畜禽中毒，使死亡率上升2%～58%。Madsen等（1982）報道，連續飼喂含OTA200μg/kg的飼料4個月，對豬的影響不大，而當OTA含量大于1400μg/kg時，顯着降低豬的采食量和生長速度，飲水量增加。Huff等（1974）報道，連續飼喂含0.5～1.0mg/kgOTA的飼料3周，對肉仔雞的增重無影響，而含0.5mg/kgOTA的飼料連續飼喂6周，可降低蛋雞的産蛋性能和飼料轉化率。

Dwivedi和Burns（1985）報道，OTA可引起畜禽免疫器官變化，使多種動物胸腺、法氏囊、脾髒和淋巴結中的白細胞數量降低，巨噬細胞和單核細胞的遷移能力下降。從Lee等（1989）的資料看，似乎還可以抑制細胞免疫（T細胞和B細胞）的活性。

Appelgren和Arora（1983），Kovasf和Vanyl（1994）報道，OTA可以透過胎盤對胎兒具有緻畸作用，但豬對其不太敏感。對OTA緻癌作用的研究目前尚停留在試驗動物階段，未見有關畜禽方面的報道。Krogh（1991）報道，血液總蛋白、白蛋白和球蛋白含量，以及腎髒磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）活性都可作為OTA中毒的敏感指标。

對OTA的中毒機理研究得較多，Endou等（1984）報道，OTA可抑制腎髒近曲小管上皮細胞的陰離子運輸系統，使尿中丙氨酸氨基肽酶（alanineaminopeptidase）和亮氨酸氨基肽酶（1euineaminopeptidase）濃度升高。Meisner等（1983，1986）先後證明，OTA可抑制腎髒PEPCK的活性，進而抑制腎髒葡萄糖生成，然而對OTA的抑制方式尚無定論。Creppy等（1983）報道，OTA還是苯丙氨酸-tRNA合成酶的競争性抑制劑，該酶對OTA的親和力大于苯丙氨酸，因而可抑制細胞内蛋白質的合成。

作用機理

赭曲黴毒素是由赭曲黴（Aspergillusochraceus）和純綠青黴（Penicilliumviridicatum）産

生的一種黴菌腎毒素，可分為A和B兩種類型，A的毒性較大。赭曲黴毒素在4℃的低溫下赭曲黴即可産生具有毒害作用濃度的赭曲黴毒素。動物攝入1ppm體重劑量的赭曲黴毒素A可在5~6天緻死。

常見的病變是腎小管上皮損傷和腸道淋巴腺體壞死。飼喂含1ppm濃度赭曲黴毒素的日糧3個月可引起動物煩渴、尿頻、生長遲緩和飼料利用率降低；飼喂含量低至200ppb的日糧數周可檢測到腎損傷。其他的臨床症狀還有腹瀉、厭食和脫水。有時臨床症狀不明顯，而在赭曲黴毒素中毒呈地方流行病的地區，動物在屠宰時惟一可觀察到的病變是腎蒼白、堅硬。

病變機理

①赭曲黴毒素A阻斷氨基酸tRNA合成酶的作用而影響蛋白質合成，使得IgA、IgG和IgM減少，抗體效價降低。

②損傷禽類法氏囊和畜禽腸道淋巴組織，降低抗體的産量，影響體液免疫，這和赭曲黴毒素的緻癌作用有關。

③引起粒細胞吞噬能力降低，從而影響吞噬作用和細胞免疫。

④赭曲黴毒素A能通過胎盤影響胎兒組織器官的發育和成熟。

臨床症狀

OTA主要毒害動物的腎髒和肝髒，腎髒是第一靶器官，隻有劑量很大時才出現肝髒病變。其中豬和禽類的敏感性最強。OTA的急性中毒反應為精神沉郁，食欲減退，體重下降，肛溫升高。消化功能紊亂，腸炎可視黏膜出血，甚至腹瀉，脫水多尿，伴随蛋白尿和糖尿。妊娠母畜子宮黏膜出血，往往發生流産。

中毒後的病理變化以腎髒為主，可見腎髒肥大，呈灰白色，表面凹凸不平，有小泡，腎實質壞死，腎皮質間隙細胞纖維化；近曲小管功能退化，腎小管通透性變差，濃縮能力下降。雞血漿總蛋白、白蛋白和球蛋白含量下降。OTA的慢性中毒還表現為凝血時間延長，骨骼完整性差，腸道脆弱及腎髒受損等。

殘留

OTA在單胃動物體組織内、及相應的畜産品内有殘留。食物中的OTA與一種緻命的地方性腎髒疾病（balkanendemicnephropathy）有關，且有緻癌、緻畸作用，近年來引起了人類營養學家的重視。其中雞和豬血液、肝髒、腎髒、肌肉和脂肪組織中均有OTA殘留（雞蛋中的殘留量很低）的報道，以血液中的殘留濃度最高，腎髒、肝髒、肌肉和脂肪組織次之。研究表明，組織中OTA殘留量與其在飼料中的含量有明顯的相關關系。而Egmond（1994）在反刍動物組織及其乳中未檢測到OTA。

對食品的污染

産生赭曲黴毒素A的黴菌廣泛分布于自然界，導緻赭曲黴毒素A廣泛分布于各種食品和飼料中。在寒帶和溫帶地區如歐洲和北美洲，赭曲黴毒素A主要來源于青黴屬的疣孢青黴；在熱帶地區，該毒素主要來源于赭曲黴。近年來發現，水果及果汁中的赭曲黴毒素A主要由碳黑瞌黴和黑曲黴産生。動物食用了含有赭曲黴毒素A的飼料，在其内髒、組織及血液中含有大量的赭曲黴毒素A

防制

發現動物中毒後，首先要停止飼喂黴變飼料，并更換易消化且富含維生素的飼料。對病情嚴重的動物要對症治療，防止脫水和保護肝髒。Creppy等（1980）報道，注射苯丙氨酸對OTA急性中毒症有療效。

在水分含量高的（18%~24%）飼料中，添加由揮發性脂肪酸組成的防黴劑有一定的防黴效果。

OTA對熱極其穩定，通過加熱脫毒的效果較差。Deberghes等（1995）報道，0.5%膽胺（cholestyramine）、γ射線和紫外線照射可以起到一定的脫毒效果。

OTA與OTB在羧基肽酶A和糜蛋白酶的催化下，可水解成苯丙氨酸和毒性較小的Oa，其中OTB的酶解速度是OTA的6～7倍，瘤胃微生物有很強的類似反應活性。De-berghes等（1995）在赭曲黴菌培養液中加入5單位的羧基肽酶，培養18天，與對照組相比，OTA産量由73.6ng/ml下降到零。由此推測，這将是有開發前途的OTA脫毒方法。

衛生标準

Hult等（1976）報道，瑞土規定豬和禽配合飼料中OTA的允許量分别不得超過200μg/kg和1000ug/kg。美國也正在制訂有關條例。其他國家尚未見有關OTA的允許量規定。國内GB2761-2011規定谷物、豆類及其制品中OTA的允許量不得超過5μg/kg。

診斷

檢測豬

赭曲黴毒素A（OchratoxinA）是赭曲黴毒素（Ochratoxins）家族中最重要的毒素，由多種曲黴菌（赭曲黴）和青黴菌（疣孢青黴）産生，這些黴菌也産生桔黴素和草酸。赭曲黴毒素普遍存在于熱帶和氣候溫和的地區，常現于燕麥，大麥，小麥和玉米農作物上。這些黴菌具有産生高達10ppm赭曲黴毒素A的能力。這樣高水平的赭曲黴毒素是很少見的，即使毒素水平很低的情況下，如0.2ppm，就可對養豬生産造成危害性影響（Krogh，1991）。

單胃動物采食被赭曲黴毒素污染的飼料可導緻其組織器官，脂肪，肌肉組織和血液被毒素污染。如果豬長時間地采食赭曲黴毒素污染的飼料，黴菌毒素可污染豬的大部分可食組織，導緻腎髒損傷和豬肉胴體等級降低。赭曲黴毒素急性中毒症（日糧毒素水平高于5ppm）的特點是腎病（腎功能衰竭），腸炎脂肪肝，淋巴結壞死，免疫抑制，并伴随着其他多種病理症狀。

由于急性腎衰竭，急性的赭曲黴毒素中毒症有可能導緻動物死亡。鑒于赭曲黴毒素可在動物可食肌肉組織中積累，進而導緻人類健康問題的特性，研究人員近期将研究重點關注于赭曲黴毒素的緻癌性方面。事實上，丹麥養豬業以腎髒赭曲黴毒素水平作為判定豬肉産品是否存在潛在的毒素危害殘留的指标。臨床症狀和剖檢可顯示赭曲黴毒素中毒症，這還可通過監測飼料中的黴菌毒素或在屠宰場檢測腎髒中的毒素水平确認赭曲黴毒素的中毒症。

由于赭曲黴毒素在血清中的半衰期相當長（72-120小時），豬隻對赭曲黴毒素的污染十分敏感。研究人員近期在加拿大和歐盟，包括德國，挪威，波蘭，瑞典以及前南斯拉夫對豬血液中的天然污染物赭曲黴毒素進行了檢測調查。同時，在美國、奧地利、比利時、丹麥、芬蘭、德國、波蘭、瑞士、英國和前南斯拉夫的調查結果顯示，赭曲黴毒素也出現在豬的腎髒中。

殘留在動物産品中的赭曲黴毒素可通過食品鍊傳遞給消費者，一些國家的政府已采取強硬的監管措施，以消除消費者對豬肉産品安全性的擔憂。例如，歐洲于1997年設立了所有食品中赭曲黴毒素的最高允許含量為5ppb。德國将這一标準更嚴格地定為3ppb。在丹麥，如果豬血液赭曲黴毒素的水平達到25μg/mL，認定為豬的整個胴體被污染，豬肉不得作為食用。

臨床影響

赭曲黴毒素中毒症的主要症狀為：生長遲緩，飼料效率降低。肝髒受損，但主要是對腎髒的影響，導緻腎間質纖維化。飲水量增加（劇渴），導緻排尿增多（多尿症），這是赭曲黴毒素中毒症的一大特點。幼齡生長豬會出現腎周水腫，并伴有僵硬。胃潰瘍也是常見的症狀。公豬的精子質量降低，受精率下降，最終導緻整體繁殖性能下降。

中毒者的臨床表現

生産性能下降（飼料采食量，生長速度，飼料效率）

腎髒蒼白、變大=腎小管變性，腎間質纖維化

腎功能受損=高蛋白血症，氮血症

腎衰竭=死亡

飲水量增加（劇渴），排尿增多（多尿症）

細胞免疫抑制=對感染的易感性大大增加

公豬精子質量降低=受精率下降=繁殖性能降低

仔豬出現水腫=弓背僵直，步調失調

胃潰瘍

谷物測定

1主題内容與适用範圍

本标準規定了谷物和大豆中赭曲黴毒素A的薄層色譜測定方法。

本标準适用于小麥、玉米和大豆中赭曲黴毒素A的測定。

在薄層闆上赭曲黴毒素A的最低檢出量為4ng。該方法的最低檢測量為10μg/kg。

2原理

用三氯甲烷-0.1mol/L磷酸或石油醚-甲醇/水提取樣品中的赭曲黴毒素A，樣品提取液經液-液分配後，根據其在365nm紫外光燈下産生黃綠色熒光，在薄層色譜闆上與标準比較測定含量。

3試劑

以下試劑除特殊規定外均為分析純試劑，水為蒸餾水或同等純度的水。

⒊1石油醚（60～90℃或30～60℃）。

⒊2甲醇。

⒊3三氯甲烷。

⒊4甲苯。

⒊5乙酸乙酯。

⒊6甲酸。

⒊7冰乙酸。

⒊8乙醚。

⒊9苯-乙腈（98：2）。

⒊100.1mol/L磷酸[c(H3PO4）=0.1mol/L]：稱取11.5g磷酸（85%）加水稀釋至1000mL。

⒊112mol/L鹽酸溶液[c(HCL)=2mol/L]：量取20mL鹽酸，加水稀釋至120mL。

⒊124%氯化鈉溶液。

⒊130.1mol/L碳酸氫鈉溶液[c(NaHCO3）=0.1mol/L]：稱取8.4g碳酸氫鈉，加适量水溶解，并用水稀釋至1000mL。

⒊14矽膠G：薄層層析用。

⒊15赭曲黴毒素A（以下簡稱OA）标準溶液：用苯-冰乙酸（99：1）配成40μg/mL赭曲黴毒素A貯備液，并用紫外分光光度計測定其濃度。濃度的測定參照GB5009.22《食品中黃曲黴毒素B1的測定方法》中2.14條（赭曲黴毒素A的最大吸收峰波長333nm，分子量403，克分子消光系數值為5550）。精密吸取貯備液，用苯稀釋成每毫升含赭曲黴毒素A0.5μg，赭曲黴毒素A标準液應置冰箱中避光保存。

4儀器

所有玻璃儀器均需用稀鹽酸浸泡，用自來水，蒸餾水沖洗。

⒋1小型粉碎機。

⒋2電動振蕩器。

⒋3玻璃闆：5cm×20cm。

⒋4薄層塗布器。

⒋5展開槽：内長25cm、寬6cm、高4cm。

⒋6紫外光燈：365nm。

⒋7微量注射器：10μL、50μL。

⒋8具0.2mL尾管的10mL，小濃縮瓶。

5分析步驟

⒌1提取

⒌1.1甲法

稱取20g粉碎并通過20目篩的樣品，置于200mL具塞錐形瓶中，加入100mL三氯甲烷和10mL0.1mol/L磷酸，振蕩30min後通過快速定性濾紙過濾；取20ml，濾液置于250mL分液漏鬥中，加50mL0.1mol/L碳酸氫鈉溶液振搖2min，靜置分層後，将三氯甲烷層放入另一個100mL分液漏鬥中（少量乳化層，或即使三氯甲烷層全部乳化都可放入分液漏鬥中），加入50mL0.1mol/L碳酸氫鈉溶液重複提取三氯甲烷層，靜置分層後棄去三氯甲烷層（如三氯甲烷層仍乳化，棄去，不影響結果）。

碳酸氫鈉水層并入第一個分液漏鬥中，加約5.5mL2mol/L鹽酸溶液調節pH2～3（用pH試紙測試），加入25mL三氯甲烷振搖2min，靜置分層後，放三氯甲烷層于另一盛有100mL水的250mL分液漏鬥中，酸水層再用10mL三氯甲烷振搖、提取、靜置，将三氯甲烷層并入同一分液漏鬥中。振搖、靜置分層，用脫脂棉擦幹分液漏鬥下端，放三氯甲烷層于一75ml蒸發皿中，将蒸發皿置蒸汽浴上通風揮幹。用約8mL三氯甲烷分次将蒸發皿中的殘渣溶解，轉入具尾管的10mL濃縮瓶中，置80℃水浴鍋上用蒸汽加熱吹氮氣（N2），濃縮至幹，加入0.2mL苯-乙腈（98：2）溶解殘渣，搖勻，供薄層色譜點樣用。

⒌1.2乙法

稱取20g粉碎并通過20目篩的樣品加于200mL具塞錐形瓶中，加30mL石油醚和100mL甲醇-水（55：45），在瓶塞上抹上一層水蓋嚴防漏。振蕩30min後，通過快速定性濾紙濾入分液漏鬥中，待下層甲醇水層分清後，取出20mL濾液置于100mL分液漏鬥中，用pH試紙測試，一般為pH5～6。

加入25mL三氯甲烷振搖2min，靜置分層後放出三氯甲烷層于另一分液漏鬥中，再用10mL三氯甲烷重複振搖提取甲醇-水層（在用三氯甲烷振搖提取時，如發生乳化現象，可滴加甲醇促使其分層），将三氯甲烷層合并于同一分液漏鬥中，加入50～100mL4%氯化鈉溶液（加入量視品種不同而異，大豆加100mL，小麥、玉米則加50mL左右），振搖放置（如為大豆樣品提取液還須輕輕反複倒轉分液漏鬥，使乳化層逐漸上升。如乳化嚴重可加入少許甲醇），待三氯甲烷層澄清後，用脫脂棉擦幹分液漏鬥下端，放三氯甲烷層于75mL蒸發皿中（如為大豆樣品須再加入10mL三氯甲烷振搖，三氯甲烷層合并于同一蒸發皿中），将蒸發皿置蒸汽浴上通風揮幹。

以下操作自“用約8mL三氯甲烷分次将蒸發皿中的殘渣溶解”起，按甲法操作。

⒌2測定

⒌2.1薄層闆的制備

稱取4g矽膠G，加約10mL水于乳缽中研磨至糊狀。立即倒入塗布器内制成5cm×20cm,厚度0.3mm的薄層闆三塊，在空氣中幹燥後，在105～110℃活化1h，取出放幹燥器中保存。

⒌2.2點樣取兩塊薄層闆，在距薄層闆下端2.5cm的基線上用微量注射器滴加兩個點：在距闆左邊緣1.7cm處滴加OA标準溶液8μL（濃度0.5μg/mL），在距闆左邊緣2.5cm處滴加樣液25μL，然後在第二塊闆的樣液點上加滴OA标準溶液8μL（濃度0.5μg/mL）。點樣時，需邊滴加邊用電吹風吹幹，交替使用冷熱風。

⒌2.3展開

⒌2.3.1展開劑

橫展劑：乙醚或乙醚-甲醇-水（94：5：1）。

縱展劑：

a.甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（6：3：1.2：0.06）或甲苯-乙酸乙酯-甲酸（6：3：1.4）；b.苯-冰乙酸（9：1）。

⒌2.3.2展開

橫向展開：在展開槽内倒入10mL橫展劑，先将薄層闆縱展至離原點2～3cm，取出通風揮發溶劑1～2min後，再将該薄層闆靠标準點的長邊置于同一展開槽内的溶劑中橫展，如橫展劑不夠，可添加适量，展至闆端過1min，取出通風揮發溶劑2～3min。

縱向展開：在另一展開槽内倒入10mL縱展劑，将經橫展後的薄層闆縱展至前沿距原點13～15cm。取出通風揮幹至闆面無酸味（約5～10min）。

⒌2.4觀察與評定

将薄層色譜闆置365nm波長紫外光燈下觀察。

a.在紫外光燈下将兩闆相互比較，若第二塊闆的樣液點在OA标準點的相應處出現最低檢出量，而在第一闆相同位置上未出現熒光點，則樣品中的OA含量在本測定方法的最低檢測量10μg/kg以下。

b.如果第一闆樣液點在與第二闆樣液點相同位置上出現熒光點則看第二闆樣液的熒光點是否與滴加的标準熒光點重疊，再進行以下的定量與确證試驗。

⒌2.5稀釋定量

比較樣液中OA與标準OA點的熒光強度，估計稀釋倍數。

薄層闆經雙向展開後，當陽性樣品中OA含量高時，OA的熒光點會被橫向拉長，使點變扁，或分成兩個黃綠色熒光點。這是因為在橫展過程中原點上OA的量超過了矽膠的吸附能力，原點上的雜質和殘留溶劑在橫展中将OA點橫向拉長了，這時可根據OA黃綠色熒光的總強度與标準熒光強度比較，估計需減少的滴加微升數或所需稀釋倍數。經稀釋後測定含量時，可在樣液點的左邊基線上滴加二個标準點，OA的量可為4ng、8ng，比較樣液與兩個标準OA熒光點的熒光強度，概略定量。

⒌2.6确證試驗

用碳酸氫鈉乙醇溶液（在100mL水中溶解6.0g碳酸氫鈉，加20mL乙醇）噴灑色譜闆，在室溫下幹燥，于長波紫外光燈下觀察，這時OA熒光點應由黃綠色變為藍色，而且熒光強度有所增加，再估計樣品中OA，如果與噴灑前情況不一緻，要利用噴灑前所做的估計。

6計算

樣品中赭曲黴毒素A的含量可按下式計算。

V11000

x=A×━━×D×━━━

V2m

式中x──樣品中赭曲黴毒素A的含量，μg/kg;

A─-薄層闆上測得樣液點上OA的量，μg;

D──樣液的總稀釋倍數；

V1─-苯-乙腈混合液的體積，mL；

V2──出現最低熒光點時滴加樣液的體積，mL；